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人可溶性腫瘤壞死因子α受體(sTNFαR)ELISA試劑盒實驗使用說明書
BS-0367人可溶性腫瘤壞死因子α受體(sTNFαR)ELISA試劑盒
一、實驗原理
采用雙抗體夾心法：
包被階段：微孔板預(yù)包被抗人sTNFαR單克隆抗體(固相抗體)。
結(jié)合階段：樣本中sTNFαR抗原與固相抗體結(jié)合，后加入生物素標(biāo)記的二抗形成“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。
顯色階段：TMB底物經(jīng)HRP催化顯色，**終止液(2mol/L H?SO?)**終止反應(yīng)并轉(zhuǎn)為黃色，450nm測OD值。
二、試劑盒組成
組分 規(guī)格 儲存條件
酶標(biāo)包 被板96孔/48孔4℃避光
標(biāo)準(zhǔn)品 0.5ml×1瓶-20℃分裝保存
終止液 6ml×1瓶2-8℃
生物素標(biāo)記抗體 6ml×1瓶4℃避光
顯色劑(A/B液) 各6ml4℃避光
三、樣本處理規(guī)范
血清：全血室溫凝固30min，2000×g離心20min，避免溶血。
血漿：肝素抗凝，1000×g離心30min，去除顆粒物。
細(xì)胞裂解液：PBS洗滌后裂解，14000×g離心10min取上清。
四、操作步驟
加樣：標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μL + 生物素抗體100μL，37℃孵育60min。
洗滌：洗板5次，拍干(避免殘留)^^2^^。
顯色：TMB避光孵育15min，終止液50μL/孔，立即測OD值。
五、數(shù)據(jù)分析
標(biāo)準(zhǔn)曲線：四參數(shù)擬合，樣本OD值代入曲線計算濃度。
質(zhì)控要求：空白孔OD值應(yīng)<0.1，板內(nèi)/板間CV<10%。
六、注意事項
終止液安全：含強(qiáng)酸，操作時佩戴防護(hù)裝備。
時效性：加入終止液后需30分鐘內(nèi)檢測，防止吸光度衰減。
干擾因素：避免NaN3、溶血或高脂樣本。
注：以上資料僅供參考，不作為實驗依據(jù)，如果其他具體信息請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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