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知識(shí)解答:ELISA實(shí)驗(yàn)中終止液的重要性
更新時(shí)間:2025-08-26瀏覽:566次

  

  ELISA實(shí)驗(yàn)中,?終止液?是確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性和可靠性的關(guān)鍵試劑,其重要性主要體現(xiàn)在以下方面:

  一、終止液的核心作用?

  終止酶促反應(yīng)?

  通過(guò)強(qiáng)酸性環(huán)境(如2mol/L H?SO?)破壞HRP酶的活性,立即停止顯色反應(yīng),防止底物(如TMB)過(guò)度轉(zhuǎn)化導(dǎo)致信號(hào)失真?。

  穩(wěn)定顯色產(chǎn)物?

  將藍(lán)色陽(yáng)離子根(TMB氧化產(chǎn)物)轉(zhuǎn)化為黃色聯(lián)苯醌,并在450nm處形成穩(wěn)定吸收峰,便于酶標(biāo)儀準(zhǔn)確讀取OD值?。

  控制反應(yīng)時(shí)間?

  加入終止液后需在30分鐘內(nèi)完成檢測(cè),避免顯色產(chǎn)物分解或顏色衰減導(dǎo)致數(shù)據(jù)偏差?。

  二、終止液對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響?

  未加終止液的后果?

  反應(yīng)持續(xù)進(jìn)行會(huì)導(dǎo)致:

  OD值隨時(shí)間升高,無(wú)法準(zhǔn)確反映初始濃度差異?。

  不同檢測(cè)孔的讀數(shù)因時(shí)間差異而不可比?。

  最佳操作規(guī)范?

  每孔添加50μL終止液(標(biāo)準(zhǔn)用量),確保反應(yīng)一致性?。

  三、安全與質(zhì)量控制?

  安全操作?:含強(qiáng)酸成分,需在通風(fēng)櫥中操作并佩戴防護(hù)裝備?。

  質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)?:空白孔OD值應(yīng)<0.1,否則提示試劑污染或操作失誤?。

  四、應(yīng)用場(chǎng)景擴(kuò)展?

  終止液已納入職業(yè)衛(wèi)生檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)(如GBZ 57—2019),用于變應(yīng)原特異性IgE抗體測(cè)定?,并在轉(zhuǎn)基因研究(如Bt蛋白檢測(cè))中確保定量準(zhǔn)確性?。

  五、注意事項(xiàng)?

  時(shí)效性?:加入終止液后需立即檢測(cè),放置超過(guò)30分鐘可能導(dǎo)致OD值下降(陽(yáng)性樣本)或升高(陰性樣本)?。

  儲(chǔ)存條件?:2-8℃避光保存,有效期通常為12個(gè)月?。

  通過(guò)規(guī)范使用終止液,可顯著提升ELISA實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和數(shù)據(jù)可靠性?。

  注:以上資料僅供參考,不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù),如果其他具體信息請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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