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ELISA檢測試劑盒如何避免假陽性現(xiàn)象及實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵點(diǎn)
1、加樣
對(duì)于間接進(jìn)口ELISA檢測試劑盒標(biāo)本一般都要進(jìn)行稀釋，如果加樣不準(zhǔn)就會(huì)造成誤差，尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時(shí)，很小的絕對(duì)誤差，會(huì)導(dǎo)致較大的相對(duì)誤差，使陰性(或弱陽性)標(biāo)本呈陽性(或陰性)。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。目前，大部分血站都已使用全自動(dòng)酶免加樣系統(tǒng)處理標(biāo)本，可較好地避免以上誤差。
2、洗滌
在進(jìn)口ELISA檢測試劑盒中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健一步，應(yīng)引起操作者重視。無論是手工操作還是機(jī)器操作，得出不正確的結(jié)果常與不正確的洗滌有關(guān)，ELISA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
3、 溫育
每種試劑都有其*合適的反應(yīng)模式，其中溫度和溫育時(shí)間控制是重要因素。因孵育溫度高，反應(yīng)時(shí)間長，會(huì)造成整板本底高，陽性率高。溫育一般用濕盒或水浴，反應(yīng)板不宜疊放，以保證各板溫度都能迅速平衡，為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋。
4、酶標(biāo)儀判讀
作為記錄測定結(jié)果的儀器，酶標(biāo)儀的性能穩(wěn)定與否，決定結(jié)果的可靠度。首先酶標(biāo)儀應(yīng)定期進(jìn)行保養(yǎng)，對(duì)濾光片要定期校正;其次酶標(biāo)儀波長設(shè)置要正確，使用雙波長，一個(gè)檢測波長，一個(gè)參比波長，以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外，在用酶標(biāo)儀讀數(shù)時(shí)先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標(biāo)儀性能有所不同，使用中應(yīng)詳細(xì)閱讀說明書
由于酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)目前在技術(shù)上缺乏標(biāo)準(zhǔn)化，盡管目前國際上以及我國有了部分標(biāo)準(zhǔn)血清或參比血清(血清盤)。但由于受方法學(xué)及技術(shù)條件的限制，在酶聯(lián)吸附測定中有時(shí)不可避免的會(huì)出現(xiàn)一定的非特異性，但我們可以通過以上措施把非特異性顯色降至限底，從而提高檢測的特異性，并得到更準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
ELISA實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記，其中，結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。進(jìn)行檢測時(shí)，樣品中的受檢物質(zhì)(抗原或抗體)與固定的抗體或抗原結(jié)合。通過洗板除去非結(jié)合物，再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，此時(shí)，能固定下來的酶量與樣品中被檢物質(zhì)的量相關(guān)。通過加入與酶反應(yīng)的底物后顯色，根據(jù)顏色的深淺可以判斷樣品中物質(zhì)的含量，進(jìn)行定性或定量的分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的靈敏度。
那么ELISA試劑盒需把握的關(guān)鍵有哪些?
1.在儲(chǔ)存及孵育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。一切試劑瓶蓋須蓋緊以避免蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染，因?yàn)榈鞍姿饷傅母蓴_將導(dǎo)致呈現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。
2.小心汲取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)刻和溫度。請(qǐng)注意在汲取標(biāo)本/規(guī)范品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，di一個(gè)孔與一個(gè)孔加樣之間的時(shí)刻距離假如太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時(shí)刻，然后明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。
3.試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃，具體以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn)。
4.濃洗滌液會(huì)有鹽分出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
5.剛敞開的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會(huì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。
6.一切的樣品都應(yīng)管理好，依照規(guī)則的程序處理樣品和檢測設(shè)備。
ELISA試劑盒 本生是實(shí)驗(yàn)室本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。
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